一种新的核苷酸定量方法
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该方法可以定量检测生物样品中的ATP、ADP、AMP、GTP、GDP、GMP、UTP、UDP、UMP、CTP、CDP和CMP

核糖核酸(RNA)是存在于所有生物体中的分子,由核糖核苷酸组成。据认为,RNA可能早于数十亿年前的原始生命中的DNA出现。随后,DNA取代了RNA,成为化学上更稳定的遗传信息载体。

线粒体疾病是由损害线粒体功能的突变引起的遗传性疾病,所有核苷酸的生物合成都可能下降。然而,关于多少、在哪些组织中以及产生什么后果,人们知之甚少。主要原因是在没有特殊色谱设备的典型研究实验室中,缺乏合适的方法来测量核糖核苷酸。如ATP可以用萤火虫萤光素酶的酶发光法测量,但其他核糖核苷单磷酸、二磷酸和三磷酸的定量对非专业实验室来说仍然是一个挑战,如果没有色谱设备,几乎不可能实现。

酶法定量脱氧核糖核苷三磷酸已经存在了几十年。相比之下,还没有通用的酶法来量化核糖核苷三磷酸(rNTP),它驱动几乎所有的细胞过程,并作为RNA的前体。因此研究人员开发了第一种在没有专业设备的情况下轻松测量小组织和细胞样本中的所有12种核糖核苷酸技术,此检测方法是基于RNA聚合酶和一种名为Broccoli的荧光RNA分子。该测定使用噬菌体T7SP6 RNA聚合酶、编码49核苷酸的Broccoli适体的两个寡核苷酸模板和高亲和力的荧光适体结合染料来量化四种典型rNTP中的每一种。在测定反应中包含核苷单磷酸和二磷酸激酶使得能够定量单磷酸和双磷酸对应物。该测定法具有固有的特异性,对浓缩的组织和细胞提取物具有耐受性。